细胞培养的步骤和方法（原代细胞培养和传代过程中何时需要额外添加血清）

细胞培养的步骤和方法？

操作步骤如下

1、剪切组织：

先将所取得的组织，用D-Hanks或Hanks液清洗，以去除表面血污，并用手术镊去除黏附的结缔组织等非培养所需组织。

再次清洗后，用手术刀将组织切成若干小块，移入青霉素小瓶或小烧杯中，加入适量缓冲液，用弯头眼科剪，反复剪切组织，直到组织成糊状，约1mm3大小。

静置片刻后，用吸管吸去上层液体，加入适当的缓冲液再清洗一次。

2、消化分离：

消化分离的目的是将细小的组织块消化分离成细胞团或分散的单个细胞，以利于进一步的培养，常用的消化酶有胰蛋白酶和胶原酶。

3、培养：

细胞悬液用计数板进行细胞计数。

用培养液将细胞数调整为（2～5）×105cells／ml，或实验所需密度，分装于培养瓶中，使细胞悬液的量以覆盖后略高于培养瓶底部为宜。

置CO2培养箱内，5％CO2，37℃静置培养。

一般3～5d，原代培养细胞可以黏附于瓶壁，并伸展开始生长，可补加原培养液量1／2的新培养液，继续培养2～3d后换液，一般7～14d可以长满瓶壁，进行传代。

原代细胞培养和传代过程中何时需要额外添加血清？

一般不用的，只是原代细胞不容易生长，可以多加一定量的血清，一般培养用10%的血清，原代时或细胞复苏时可以加到20%，这样有利于生长。

你所说的在何时需要额外添加血清，在一般情况是不用的，但是在培养基变黄之前要进行更换培养基，这样血清也一并换了。

当然如果你想让他快速进入对数期，可以留一部份培养液，因为里面有一定的生长因子。

可以帮助自身细胞生长。

动物细胞的原代培养与传代培养有啥区别？

传代培养是组织培养常规保种方法之一。

也是几乎所有细胞生物学实验的基础。

当细胞在培养瓶中长满后就需要将其稀释分种成多瓶,细胞才能继续生长。

这一过程就叫传代。

原代培养是将动物机体的各种组织从机体中取出,经各种酶(常用胰蛋白酶)、螯合剂(常用EDTA)或机械方法处理,分散成单细胞,置合适的培养基中培养,使细胞得以生存、生长和繁殖。

细胞系(CellLine):原代培养舞经首次传代成功即成细胞系,由原先存在于原代培养物中的细胞世系对于人类肿瘤细胞,在体外培养半年以上,生长稳定,并连续传代的即可称为连续性株或系。

说明：转载此文是出于传递分享更多信息之目的。若有侵权请作者持权属证明与我们联系，我们将及时更正、删除，谢谢您的支持与理解。